Préparation d'échantillon

En règle générale , un échantillon préparé pour l'autoradiographie doit être complètement sec pour minimiser l'atténuation de l'émission bêta. La procédure qui consiste à placer un buvard ou un échantillon humide dans un sachet ou dans un film plastique entraîne une dégradation importante de la sensibilité et de la résolution, en particulier lors de l'utilisation d'isotopes de plus faible énergie (par ex. le ³⁵ S), et élimine totalement la détection du ³ H. De plus, il est important que le matériel de buvardage utilisé dans une expérience soit celui qui ait le maximum d'affinité avec la biomolécule transférée, par ex. du nylon chargé positivement pour un acide nucléique. Le choix approprié de la membrane garantit que la radioactivité est au plus proche de la surface (déterminant ainsi le côté actif du buvard) qui peut être placée le plus près du film et du phosphore afin de maximiser la sensibilité et la résolution spatiale.

L'assurance qu'un buvard puisse être réextrait et réutilisé pour l'autoradiographie après le séchage est une source de préoccupations. En général, si les molécules absorbées par le buvard sont correctement réticulées à la membrane et que le buvard est correctement bloqué et utilisé, la réextraction et la réutilisation après séchage ne seront pas défavorablement affectés.

La simple définition opérationnelle du séchage à air est suffisante pour une utilisation avec le BioMax TranScreen, alors que la moindre humidité peut provoquer un grave problème de collage et/ou d'électricité statique si un buvard est exposé à la surface d'un film. La surface du BioMax TranScreen résiste efficacement à l'effet négatif que l'eau et/ou la glace auraient normalement sur le phosphore.

Chambre noire et éclairage inactinique

IMPORTANT : le film BioMax MS est extrêmement sensible à la lumière verte, jaune et bleue et ne doit être exposé qu'avec le filtre d'éclairage inactinique GBX-2 rouge et une ampoule de 7,5 ou 15 watts. L'utilisation d'autres filtres d'éclairage inactinique et d'ampoules plus puissantes augmentera considérablement l'effet de voile d'arrière-plan du film exposé. Veuillez consulter les instructions et mesures de précaution fournies avec le film. Le BioMax TranScreen est résistant à l'exposition à la lumière pendant une période indéfinie. En outre, la période d'émission de lumière après l'exposition au phosphore est suffisamment courte (quelques secondes) pour ne nécessiter aucune précaution particulière telle qu'une adaptation à l'obscurité de l'écran.

Instructions pour l'utilisation du système BioMax TranScreen

ÉTAPE 1. Dans des conditions de chambre noire appropriées, sortez le film de la boîte et insérez-le dans la chemise BioMax TranScreen. Cette dernière est conçue pour minimiser l'effet de voile provoqué par de mauvaises conditions de chambre noire. Reportez-vous à la section concernant la chambre noire et l'éclairage inactinique pour en savoir plus sur les conditions de chambre noire appropriées.

ÉTAPE 2. Placez la face active de l'échantillon sur la surface luminophore de la chemise, comme indiqué sur le schéma.

ÉTAPE 3. Placez la combinaison film/écran dans une cassette et fermez la cassette.

ÉTAPE 4. La cassette doit ensuite être placée dans un congélateur (-60 à -80 °C). L'utilisation d'un congélateur est importante afin de maximiser la sensibilité du système.

ÉTAPE 5. Après l'exposition, laissez la cassette se réchauffer à température ambiante pendant au moins 15 minutes avant de l'ouvrir. Cela permettra d'éviter l'endommagement la charnière de la cassette et de minimiser la formation de condensation d'eau sur le film exposé, l'échantillon et l'écran BioMax TranScreen.

ÉTAPE 6. Dans des conditions de chambre noire appropriées, ouvrez la cassette et démontez le sandwich élaboré. L'un des coins de la chemise BioMax TranScreen est entaillé afin de faciliter l'accès au film.